فهرست موضوعي

پروتئینهای فاز حاد
Acute phase proteins
 نقش
 كاربرد CRP
سنجش CRP
محتويات كيت  CRPبا روش کیفی
انجام آزمايش CRP
روش کمی (لوله ای)
نتايج كاذب   CRP  
آزمايش RF Rheumatoid Factor
مقدمه
عوامل زمينه ساز RA
نكات مهم در RF
مواد و معرف های موجود در کیت در روش کیفی
انجام آزمايش RF كيفي Qualitative
آزمايش روماتوئيد فاكتور RF
تست RFبه روش لوله ای (کمی)
نكات ضروري در RF
نتايج كاذب  RF

•آزمايش

 CRP


C –Reactive protein

•

•

• نقش CRP

q اتصال CRP به فسفوریل کولین(PC) بعضي باكتريها، قارچها، انگلها، حتي لكوسيتها و سلولهای آسیب دیده و پاکسازی آنها و مبارزه با عامل بیگانه به دو روش:

Ø

Ø مستقیم ← می تواند به عنوان یک اپسونین عمل کند

q

q

Øغیر مستقیم←  می تواند به عنوان فعال کننده کمپلمان عمل کند

q

qجلوگیری از فعال شدن فاكتورهاي پلاكتي

q

qCRP  به دنبال تحریک سریعا بالا می رود و پس از خاتمه تحریک سریعا پایین می آید

q

q

•

 كاربرد CRP : 

1- تشخيص وجود عفونتهاي باكتريال         2- تب روماتيسمي

3- سكته قلبي حاد(بعنوان مارکر)               4- سرطان هاي بدخيم منتشر

5- آرتريت روماتوئيد فعال          6- عفونت هاي ويروسي

7- سل           8- بعد از اعمال جراحي

9- دريافت خون          10- واكسيناسيون

11- آمبولي ريه

•سنجش CRP

 اگرچه برای سنجش  CRPسرمی روشهای متعددی وجود دارد، روش آگلوتیناسیون با کمک لاتکس در ایران متداول تر است

 این روش یک  Reverse Passive Agglutination  است

Ø آنتی ژن:

CRP  موجود در سرم

Ø آنتی بادی:

 Anti-CRP متصل شده به لاتکس

•محتويات كيت  CRPبا روش کیفی

 سوسپانسيون ذرات لاتكس  : حاوي آنتي CRP

 كنترل مثبت: سرم حاوی CRP

 كنترل منفي : سرم فاقدCRP

 اسلايد زمينه مشكي

 همزن پلاستيكي يكبار مصرف

•انجام آزمايش CRP

•

•خواندن نتیجه پس از دودقیقه

•

•روش کمی (لوله ای)

•

•برای هر نمونه سرمی، 7عدد لوله آزمایش را با شماره های 1 تا 7 علامت گذاری کنید.

•به همه لوله ها 50 لاندا (میکرولیتر) بافر PBS یا سرم فیزیولوژی اضافه نمایید.

•به لوله شماره 1، 50 لاندا سرم بیمار را اضافه نموده با تکان دادن لوله محتویات داخل لوله را مخلوط نمایید(غلظت 2/1).

•سپس 50  لاندا از محلول لوله شماره 1 را به لوله شماره 2 اضافه کنید و بعد از مخلوط کردن این عمل را برای لوله‏های دیگر بطور سریال تکرار نمائید. (2 به 3 و...).

•در آخر 50 لاندا از محلول لوله شماره7 را بیرون بریزید.

•با این روش رقتهای مختلفی از سرم (2/1 و 4/1 و 8/1 و 16/1 و ...) تهیه می‏شود.

•هر کدام از نمونه‏های رقیق شده را براساس روش کیفی بررسی کنید

•آخرین رقتی را از سرم که واکنش آگلوتیناسیون در آن قابل مشاهده است به عنوان تیتر CRP گزارش نمایید.

•

•نتايج كاذب   CRP 

مثبت كاذب:

كدورت و چرب بودن سرم

كدورت محلول بافر

اسيدي بودن بافر

حرارت ندادن سرم(وجود C1q)

استفاده از پلاسما(وجود فیبرینوژن)

منفي كاذب:

پديده پروزون

بيماران تحت درمان با ACTH و كورتيزون

•

•آزمايش
 RF
 
 Rheumatoid Factor

•مقدمه

ü بيماري خود ايمني Auto-Immune Disease  

ü

ü ازدياد حساسيت تيپ 3

ü

ü درگيري مفاصل

ü

ü ايجاد فاكتور روماتوئيد (آنتي بادي عليه FC ملكول IgG)

ü

ü اكثراً از كلاس IgM و گاهي IgG و IgA

ü

•

•عوامل زمينه ساز RA

qباكتريايي : ميكوپلاسما،استرپتوكك،كلستريديوم پرفرنژانس

q

qعوامل آلرژيك: زمينه هاي آسم

q

q‍‍ ژنتيك: HLA-B27, HLA-D4 , HLA-DR4

q

q هورموني: استروژني. زنان به مردان:3 به 1

q

q ويروسي : ‌EBV, Parovirus

q

v توليد IgG غير طبيعي : فقدان قند گالاكتوز

q

•

•نكات مهم در RF

—4-1%  افراد طبيعي     Pos

—

—20%  افراد 65 ساله Pos                  

—

—40%  افراد75 ساله   Pos  

— 20%  بيماران           Neg            

•مواد و معرف های موجود در کیت در روش کیفی

•بافر: جهت رقيق كردن سرم

•

•محلول لاتكس: حاوي IgG

•

•كنترل مثبت:  سرم داراي  RF

•

•كنترل منفي: سرم فاقد RF

•انجام آزمايش RF
كيفي Qualitative

•آزمايش روماتوئيد فاكتور RF

•تست RFبه روش لوله ای (کمی)

•1- براي هر نمونه سرمي 7عدد لوله آزمايش را با شماره هاي ۱ تا 7 علامت گذاري كنيد.

•۲- به همه لوله ها ۵۰ لاندا ( ميكروليتر) بافر PBS يا سرم فيزيولوژي مي ريزيم ( بسته به نوع كيت اين مقدار متغير است).

•۳- به لوله شماره ۱، ۵۰ لاند سرم بيمار را اضافه كنيد. ( غلظت ۲/۱)

•۴- ۵۰  لاندا از محلول لوله شماره ۱ را به لوله شماره ۲ اضافه كنيد و بعد از مخلوط كردن اين عمل  را براي لوله هاي ديگر بطور سريال تكرار نمائيد. ( ۲ به ۳ و…).

•۵- در آخر ۵۰ لاندا از لوله ي 7 را بيرون بريزيد.

•با اين روش غلظتهاي مختلف از سرم ( ۲/۱و ۴/۱ و ۸/۱ و ۱۶/۱ و …) تهيه مي شود.

•۶- هر كدام از نمونه هاي دقيق شده را براساس روش كيفي بررسي كنيد

•۷- آخرين رقتي از سرم كه واكنش اگلوتيناسيون در آن قابل مشاهده است به عنوان تيتر فاكتور روماتوئيدي (( RFگزارش مي شود.

•نكات ضروري در RF

•

•نگهداري كيت در يخچال

•

•توجه به تاريخ انقضاء

•

•رساندن محلول ها به دماي آزمايشگاه قبل ازآزمايش

•

•تكان دادن محلول حاوي لاتكس

•

•قرار دادن كيت ها در يخچال پس از اتمام كار

•سرم تازه و شفاف باشد

•

•

•

•نتايج كاذب  RF

Øمثبت كاذب:

•كدورت و چرب بودن سرم

•كدورت محلول بافر

•اسيدي بودن بافر

•استفاده از پلاسما بجاي سرم

•

Øمنفي كاذب:

•پديده پروزون