بخشی از متن اصلی:
كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس در برگيرنده مهمترين پاتوژنهاي تنفسي نشخواركنندگان است كه ساليانه، خسارات اقتصادي سنگيني بر صنعت دامپروري كشورهاي جهان وارد مي‌كند. اخيرا شيوعهاي بازپديدي از عفونتهاي پلوروپنوموني نشخواركنندگان در منطقه خاورميانه گزارش شده است. در اين شرايط تعيين وضعيت گله‌هاي كشور از نظر آلودگي به گونه‌هاي پاتوژن اين كلاستر، از اهميت خاصي برخوردار است. هنوز گزارشي از شناسايي و جداسازي گونه‌هاي درگير از عفونت پلوروپنوموني در ايران بدست نيامده است. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك در نمونه‌هاي باليني و دشواريهاي فراوان جداسازي ميكروارگانيسم، به ضرورت شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي جايگزين افزوده است.
علاوه بر اين، دستيابي به روشي كاربردي و سريع، در تشخيص عفونتهاي تنفسي گله‌ها و تخميني از وضعيت عفونت در ايران، مدنظر اين تحقيق بوده است.
در اين مطالعه، 100 نمونه ريه با ضايعات مشكوك به عفونتهاي تنفسي مايكوپلاسمايي از 100 گله مشكوك (50 گله گاو،30 گله گوسفند،20 گله بز) در اطراف كرمانشاه ، در سالهاي 1386-1384 جمع آوري شدند. ضايعات ماکروسکوپي شامل کبدي شدن ريه‌ها با زخم‌هاي خاکستري و سفيد(جامد شدن) و ظاهر منقوط با يا بدون فيبرين بودند. نمونه‌ها در محيط کشت PPLO براث و آگار کشت داده شدند. پس از پاساژهاي متعدد،از 23 گله مشکوک،تک کلوني تخم‌مرغي شکل مايکوپلاسما جداشد(11 گله گاو،8 گله گوسفند،4 گله بز).
اما در واكنش, PCR63 گله عفونت مايكوپلاسماي تنفسي نشان دادند (37 گله گاو، 17 گله گوسفند، 9 گله بز).
اين امر، مبين اين نكته است كه عليرغم اينكه جداشدن عامل مايكوپلاسمايي از نمونه‌ها در محيط كشت، اساس تعيين وضعيت عفونتهاي مايكوپلاسمايي قلمداد مي‌شود، اما سخت‌رشد بودن گونه‌هاي مورد مطالعه در محيط كشت و عدم دستيابي سريع به نتيجه، كارآيي اين روش تشخيصي را در پايش متداول عفونت گله‌ها زير سوال برده است.
علاوه بر اين، بكاربردن آنتي بيوتيكهاي متنوع در دوره درمان و از بين رفتن ميكروارگانيسم در خلال جمع آوري نمونه، نتايج رشد در محيط كشت مايكوپلاسما را دستخوش تغيير داده است.
از اين رو، استفاده از روشهاي مولكولي PCR بعنوان يك روش كاربردي، حساس و سريع توصيه مي‌شود. پس از استخراج DNA نمونه‌ها به روش فنل کلروفورم و جدا كردن نمونه‌هاي آلوده به مايكوپلاسما از طريق PCR ، با استفاده از پرايمر اختصاصي كلاستر مايكوئيدس نمونه‌هاي مايكوپلاسمايي تحت واكنش PCR قرار گرفتند.
فهرست
عنوان صفحه
الف- مقدمه 1
ب-چکيده 3
فصل اول:کليات 5
1- تاريخچه 6
2- خصوصيات کلي مايکوپلاسما 6
3- مقاومت مايکوپلاسماها 8
4- طبقه بندي مايکوپلاسماها 9
5- طبقه بندي کلاستر مايکوئيدس 12
6- فيلوژني 14
7- ساختمان 15
1-7-ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس 15
2-7- ساختمان مايکوپلاسما کاپري کولوم 17
8- بيولوژي مولکولي 19
9- توالي‌هاي تکراري 23
10- پروتئينهاي سطحي 25
11- فاکتور حدت 30
12- آناليز پروتئين 32
13- طبقه بندي سويه‌ها 34
14- مشخصات گونه مايکوئيدس 35
15- کشت و رشد گونه مايکوئيدس 38
16- کشت و رشد گونه کاپري کولوم 41
1-16- محيط Thiacourt 41
17- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان 44
1-17- علائم باليني 45
2-17- علائم کالبدگشايي بيماري 47
3-17- پاتوژنز 50
1-3-17- مکانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني 53
4-17- اختصاصيت ميزبان 57
5-17- انتقال بيماري 58
6-17- سير همه گيري 59
1-6-17- مخزن 59
2-6-17- راه انتقال 59
7-17- پيشگيري و کنترل 60
1-7-17- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري 61
2-7-17- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري 62
3-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي 63
18- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان 63
1-18- علائم باليني 64
2-18- علائم کالبد گشايي 66
19- گونه مايکوپلاسما کاپريکولوم کاپريکولوم 69
1-19- سندروم MASKePs 70
2-19- علائم باليني 71
3-19- علائم کالبد گشايي 71
4-19- سندروم آگالاکتيه واگير 73
20- گونه مايکوپلاسما کاپري 73
1-20- بيماريزايي 73
2-20- علائم کالبد گشايي 74
21- سير همه‌گيري 75
1-21-مخزن 75
2-21-راه انتقال 76
3-21-جمعيت ميزبان 77
22-پيشگيري وکنترل 77
1-22- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماري 77
2-22- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري 78
3-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي 78
23-واکسن 79
1-23-واکسن MmmLC 79
2-23-واکسن Mccp 7
25-تشخيص افتراقي 80
1-25-شناسايي عامل بيماري زا 81
1-1-25-بررسي ميکروسکوپيک اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي 81
2-25- تشخيص آزمايشگاهي 81
1-2-25- روش کشت و جداسازي 81
1-1-2-25- انتخاب نمونه ها 82
2-1-2-25- آماده سازي نمونه ها 82
3-25- تستهاي بيوشيمي 83
4-25- روشهاي سرولوژي 85
1-4-25- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي 85
2-4-25- تست مهاري رشد 87
3-4-25- تست ايمونو فلورسانس 88
4-4-25- تست رسوب ژلي 88
5-4-25- تست فيکساسيون کامپلمان 89
6-4-25- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون 89
7-4-25- تست آگلوتيناسيون لاتکس 90
8-4-25- تست اليزاي رقابتي 91
9-4-25- ساير تستهاي تشخيصي 94
5-25 - مشکلات روشهاي سنتي 94
6-25- تشخيص با استفاده از PCR 95
فصل دوم: روش کار
26- روش کار 101
1-26- جمع آوري نمونه 101
1-1-26- مواد لازم 101
2-1-26- بخش جمع آوري نمونه 101
3-1-26- نمونه برداري 103
2-26- کشت و جداسازي نمونه ها 104
1-2-26- مواد لازم 104
2-2-26- طرز تهيه محيط کشت اختصاصي براي جداسازي مايکوپلاسماي نشخوار کنندگان 106
1-2-2-26- مواد لازم 106
2-2-2-26- روش تهيه محيط کشت 107
3-26- استخراج DNA مايکوپلاسما 109
1-3-26- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي 109
4-26- فرايند PCR 110
1-4-26- مواد لازم 110
2-4-26- آماده سازي مواد جهت واکنش PCR 112
1-2-4-26- افزوده سازي DNA نمونه‌ها 112
2-2-4-26- افزوده سازي DNA کلونيهاي جدا شده 115
3-2-4-26- تهيه مخلوط اصلي اوليه 115
3-4-26- پرايمرها 115
4-26- واکنش PCR 117
5-26- تهيه ژل الکتروفورز 118
1-5-26- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد 119
6-26- الکتروفورز 121
7-26- رويت باندهاي ايجاد شده 122
فصل سوم: نتايج
27- نتايج 124
1-27- جداسازي 124
1-1-27- بررسي عملکرد محيط کشت 124
2-1-27- نتايج کشت نمونه هاي ارسالي 124
1-2-1-27- نتايج روز پنجم 125
2-2-1-27- نتايج روزهفتم تا دهم 125
3-2-1-27- نتايج روزپانزدهم 126
2-27- نتايج PCR 126
1-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس 126
2-2-27- تائيد کلوني هاي جدا شده 127
3-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر کلاستر مايکوئيدس 127
4-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاکتيه 128
5-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايکوئيدس کلوني بزرگ 129
3-27- نتايج کالبد گشايي 130
1-3-27- معيار انتخاب 130
این فایل به همراه چکیده، فهرست مطالب، متن اصلی و منابع با فرمت docx(قابل ویرایش) در اختیار شما قرار می گیرد.
تعداد صفحات:150
برچسب ها:
PCR دامپزشكي كلينيكال پاتولوژي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي مايكوپلاسما مايكوئيدس واريته مايكوئيدس مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم گوساله‌ها كشتار روش PCR استخراج DNA مايکوپلاسما فرايند PCR تحقیق عفونت ريوي تحقیق پیرامو