واکنش
زنجیره ای پلی مراز :
•مخترع
واکنش PCR کَری
مولیس (Kary
Mullis) می
باشد که در سال 1983 این روش را جهت تکثیر DNA معرفی کرد.
•
• قبل
از این کشف، ساخت قطعات DNA با
روش های کند و پر هزینه شیمیایی انجام می گرفت.
•
•به
دلیل اهمیت این اختراع، کاربردهای فراوان و نقش ارزنده آن در پیشرفت علم ژنتیک و
زیست شناسی مولکولی، وی جایزه نوبل شیمی را در سال 1993 دریافت کرد.
•واکنش
PCR به
طور روزمره در اکثر آزمایشگاه های تشخیصی و تحقیقاتی استفاده می شود و در موارد
بسیاری مثل :
•شناسایی
و جداسازی ژن ها
•
کلونینگ
• طبقه
بندی و شناسایی موجودات زنده
•تشخیص
بیماری های ژنتیکی
•و حتی
پرونده های جنایی و تعیین هویت کاربرد دارد.
اولین
قدم در مهندسی ژنتیک جداسازی با خالص سازی DNA و RNA می باشد. که این کار دارای مراحلی است
که عبارتند از :
1)
شکستن سلول
•سلول های حیوانی(شوک اسمزی- سدیم
دودسیل سولفات)
•سلول های گیاهی (پکتیناز و سلولاز)
•باکتری ها با توجه با گرم مثبت یا
گرم منفی
2) رسوب دادن DNA
و RNA :
•الکل سبب تجمع و رسوب ماده ژنتیکی می
شود.
3) جدا کردن DNA
وRNA :
4) رسوب پروتئین ها : (استفاده از فنل و یا محلول های غلیظ نمک های مختلف)
5) جداسازی DNA و RNA از یکدیگر: (استفاده از DNase و RNase)
6)رسوب ماده ژنتیکی با اتر
7) اسپکتروفتومتری:(جهت تایید استخراج)
•تکنیکی است که با استفاده از آن می توان در
مدت زمان کوتاهی قطعه خاصی از مولکول DNA را در شرایط آزمایشگاهی میلیون ها بار
تکثیر نمود.
•این قطعه DNA ممکن است:
•یک ژن
• بخشی از یک کروموزوم
• یا بخش هایی از ژنوم یک موجود باشد.